HT-29细胞培养,人结肠癌细胞培养攻略

发布网友 发布时间：2024-10-23 23:30

我来回答

共1个回答

热心网友 时间：2024-11-05 23:27

HT-29细胞源自一位44岁白人女性的结直肠腺癌原发肿瘤，广泛用于结肠癌和毒理学研究。

这些细胞在培养中表现为贴壁生长，显微镜下观察呈现上皮细胞形态，易于形成细胞团。在良好的状态下，其生长速度很快，呈现不规则的三角形，适用于作为转染宿主。此外，HT-29细胞在裸鼠中能致瘤，形成与结肠原发性（I级）一致的高分化腺癌，在经类固醇处理的仓鼠中也表现出致瘤性。

HT-29细胞还具有以下特性：

1) 能够合成IgA、CEA、转化生长因子β结合蛋白和粘液素等。

2) 表达尿激酶受体（u-PAR），但未检测到纤溶酶原激活物活性。

3) 细胞CD4表达阴性，但细胞表面表达半乳糖神经酰胺，这是HIV的可替代受体。

4) 致癌基因c-myc、K-ras、H-ras、N-ras、Myb、sis、fos表达阳性，过量产生p53抗原，且在p53基因的273密码子处有G-A突变导致Arg-His替换，未检测到致癌基因N-myc。

推荐使用1640培养基，含10%胎牛血清，在37度、5% CO2培养箱中培养。细胞传代建议按1:3-1:4的比例进行，室温下用胰酶消化2-3分钟，传代周期通常为3-4天。复苏后的HT-29细胞在第一周可能会出现大量漂浮细胞，此时可更换新鲜培养基，并将漂浮的细胞离心收集后加回培养瓶中与贴壁细胞共同培养。新复苏的细胞最初以补丁形态三维接触生长，随着细胞分裂生长，最终会变回上皮细胞形态的单层扁平生长。

该细胞库的STR鉴定结果准确无误，且支原体检测为阴性。（细胞图片或视频，裸鼠成瘤视频/图片，STR结果展现，支原体阴性呈现）

总结：

1. 上皮细胞，易于成团生长，状态良好时呈不规则三角形。

2. 推荐使用1640培养基。

3. 新复苏的细胞以补丁形态三维接触生长，分裂生长后变回上皮细胞形态的单层扁平生长。

4. 细胞复苏后易漂浮，需更换新鲜培养基，并将漂浮的细胞离心收集后加回原瓶。

5. 推荐传代比例为1:3-1:4，传代周期为3-4天。